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B6-G/R


品系名称:B6/JGpt-H11em1Cin(CAG-LoxP-ZsGreen-Stop-LoxP-tdTomato)/Gpt

简称:B6-G/R

品系类型:Knock-in

品系编号:T006163

背景:C57BL/6JGpt

 

品系描述

在生物学研究中,可以利用荧光蛋白将某些需要研究的细胞与错综复杂的背景区分开来。通过光学成像对它们进行观察和定量分析,同时研究它们在时间与空间上的特性;在另一个层次上,也可以将GFP表达在特定的细胞中,来观察这些细胞的运动和行为。

我们将绿色荧光蛋白ZsGreen与红色荧光蛋白tdTomato相结合,同时敲入到鼠源的H11基因位点。正常情况下,小鼠全身表达ZsGreen而可激发出耀眼的绿光,可以照亮各种细胞、组织的形态和结构,因此,小鼠刚出生时候是全身泛绿,与众不同。但我们在ZsGreen两侧埋设了loxP位点,当Cre重组酶存在时,小鼠基因组中的ZsGreen会被删除,开启tdTomato的表达,可发出眩目的红光。由于Cre是可以组织特异性表达的,而小鼠跟随Cre的表达时间和位置开启红光。

本模型可利用Cre/loxP位点特异性重组系统对细胞命运进行追踪展示,揭示特定类型细胞在发育、疾病中的再生、自我更新、分化过程。双荧光报告基因系统提供zsGreene及tdTomato两种荧光标记,实现了重组/非重组细胞的实时检测,因此,本模型也是一种示踪特异性Cre表达位置的理想工具。

 

应用领域

1.示踪Cre的表达

2.组织、细胞标记

 

验证数据

1.小鼠表达绿色荧光蛋白检测

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图1 B6-G/R小鼠绿色荧光蛋白表达检测。B6-G/R小鼠,取其心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾、脑、肌肉、皮肤、胰腺等组织切片后,在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况。

结果显示:可观察到B6-G/R小鼠各组织横切面均有绿色荧光表达。

结果表明:B6-G/R小鼠主要组织能够表达ZsGreen荧光蛋白。

 

2.B6-G/R小鼠表达红色荧光蛋白检测

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图2 B6-G/R小鼠红色荧光表达检测。使用B6-G/R小鼠与Cre配繁,当其后代小鼠的细胞中Cre重组酶存在时,小鼠基因组中的ZsGreen会被删除,开启tdTomato的表达,发红色荧光,对照鼠为B6-G/R,发绿色荧光。 取小鼠主要组织切片后,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白和绿色荧光蛋白的表达情况。

结果显示:可观察到B6-G/R与Cre配繁产生的后代,表达Cre的组织细胞横切面均有红色荧光表达,而对照组只有绿色荧光蛋白的表达。

结果表明:B6-G/R小鼠与表达Cre重组酶的小鼠配繁后,能删除FLOX区域,开启tdTomato的表达(Cre-为B6-G/R小鼠简写;Cre+为B6-G/R与CAG-cre交配后代小鼠简写。200倍镜下荧光图片)。

 

参考文献

1.Muzumdar MD; Tasic B; Miyamichi K; Li L; Luo L. 2007. A global double-fluorescent Cre reporter mouse. Genesis 45(9):593-605.

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