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Cd19-Cre

 

系名称:B6/JGpt-Cd19em1Cin(P2A-iCre)/Gpt

品系类型:Knock-in

品系编号:T003785

背景:C57BL/6JGpt

 

品系描述

Cd19主要表达于B-cell表面,集萃药康采用基因编辑技术制作Cd19启动子驱动下在B淋巴细胞中特异性表达Cre重组酶的B6-CD19-Cre小鼠模型。B6-CD19-Cre小鼠可以应用于在B淋巴细胞中诱导LoxP重组。例如删除FLOX区域,即将该工具鼠与得到的条件性敲除模型小鼠配繁,可在B淋巴细胞中删除两个LoxP之间的基因片段。

本方案与文献[1]相比,Cre插入在Cd19 基因C端而非exon上,因此可产生表达Cre同时Cd19基因不被破坏的纯合子小鼠,故本品系不可当作Cd19敲除模型使用;本方案中无抗性基因Neo的插入,因此无须与Flp鼠配繁去除Neo。

 

应用领域

1.B-cell中特异性表达Cre的工具鼠

 

验证数据

1.Cre特异性表达检测

1)冰冻切片观察

检测方法:使用B6-CD19-Cre鼠配繁rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP小鼠。rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP小鼠表达红色荧光,当与表达Cre重组酶的小鼠交配,后代在表达Cre的细胞中tdTtomato缺失,则表达绿色荧光。通过冰冻切片观察,可观察到绿色荧光表达情况,从而确认Cre蛋白在小鼠脾脏细胞中的表达情况。

观察结果:观察组织冰冻切片,可见rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP与CD19-Cre交配后代小鼠中脾脏细胞的tdTomato及stop原件被切除,表达绿色荧光EGFP。

脾脏:

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1 B6-CD19-Cre小鼠Cre蛋白在脾脏中的表达检测。Cre能够在脾脏组织中表达,能够观察到绿色荧光。

 

2)流式检测

检测方法:使用B6-CD19-Cre鼠配繁rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP小鼠。rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP小鼠表达红色荧光,当与表达Cre重组酶的小鼠交配,后代在表达Cre的细胞中tdTtomato缺失,则表达绿色荧光。通过FACS分选后将表达CD19的细胞富集,检测红色荧光和绿色荧光表达情况。

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图2 B6-CD19-Cre小鼠Cre蛋白在淋巴结中的表达检测。

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3 B6-CD19-Cre小鼠Cre蛋白在脾脏中的表达检测。

流式检测淋巴结和脾脏CD19细胞中EGFP表达。B6对照小鼠CD19+细胞中没有tdtomato,GFP荧光蛋白表达,rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP对照鼠CD19+细胞中只有tdtomato荧光蛋白,配cre的阳性小鼠CD19+细胞中均可检测出EGFP表达。

备注:tdtomato与PE-CF594相同荧光通道

 

2.全身表达检测(脑、心、肝、肾、肠、胰腺、骨骼肌、胃、脊髓)

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rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP与B6-CD19-cre交配后,通过观察各组织冰冻切片,均未观察到EGFP绿色荧光,仅能观察到红色荧光。表明CD19-cre在这些组织中无表达。上图为倍数:100×; 下图为:200×;A. DAPI B. GFP C. tdTomato D. merge

参考文献

1.RickertRC, Roes J, RajewskyK.Blymphocyte-specific,Cre-mediated mutagenesis in Nucleic Acids Res. 1997 Mar 15. 25(6):1317-8

品系名称:LGR5-CreERT2

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