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LGR5-CreERT2

 

品系名称:B6/JGpt-Lgr5em1Cin(cre/ERT2)/Gpt

品系类型:Knock-in

品系编号:T003768

背景:C57BL/6JGpt


品系描述

Lgr5基因编码的蛋白属于G蛋白偶联受体(GPCR)超家族。其编码蛋白参与R-spondins通路和经典Wnt信号途径。Lgr5蛋白在胚后发育和肠道干细胞的形成和维持中起重要作用。成年小鼠体内,Lgr5表达局限于小肠柱状上皮细胞(小肠干细胞)和结肠干细胞、胃腺上皮干细胞、乳腺腺体上皮基底层干细胞、癌前小鼠腺瘤、结肠癌细胞等组织细胞内。

Lgr5-creERT2品系在小鼠自身Lgr5基因终止密码子后,插入由IRES衔接的creERT2基因。IRES衔接的creERT2基因与小鼠Lgr5基因共转录,同时creERT2基因仅在Tomoxifen诱导下表达cre蛋白。

Lgr5-creERT2小鼠可作为组织特异性范围内诱导LoxP重组的Cre工具鼠。例如删除FLOX区域,即将该工具鼠与得到的条件性敲除模型小鼠配繁,在Tomoxifen诱导下可在Lgr5表达的组织特异性范围内删除两个LoxP之间的基因片段。


品系应用

Lgr5阳性表达细胞(成年小鼠多为肠道上皮干细胞)中可诱导特异性表达cre的工具鼠。Tomoxifen诱导下可促使在Lgr5阳性表达细胞中的特异性LoxP系统重组,研究肠道相关基因与相关疾病。

特异性表达检测

小肠:

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结肠:

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图1 B6-Lgr5-CreERT2小鼠Cre组织特异性表达检测。Cre能够在这些检测的组织中表达,能够观察到绿色荧光。

检测方法:后代小鼠接受Tomoxifen诱导一周。rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP小鼠表达红色荧光,当与表达cre重组酶的小鼠交配,后代在表达cre的细胞中红色荧光缺失,表达绿色荧光。通过冰冻切片观察,可观察到绿色荧光表达情况,从而确认cre蛋白在肠道上皮组织中的表达情况。

观察结果:观察小肠和结肠冰冻切片,可见rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP与Lgr5-creERT2交配后代小鼠,接受Tomoxifen诱导一周,肠道上皮干细胞中tdTomato等原件被切除,可表达绿色荧光EGFP;其他不能表达cre的细胞仍表达红色荧光。

备注: Reporter x Lgr5-creERT2为rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP与Lgr5-creERT2交配后代小鼠简写。(倍数为:200×)

 

参考文献

1.Barker N; van Es JH; Kuipers J; Kujala P; van den Born M; Cozijnsen M; Haegebarth A; Korving J; Begthel H; Peters PJ; Clevers H. 2007. Identification of stem cells in small intestine and colon by marker gene Lgr5. Nature 449(7165):1003-7.

品系名称:Alb-Cre 品系名称:Cd19-Cre

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